الكاتب: ربا رضوان أبا زيد وعلا عيسى

الأستاذ المشرف: د. محمد سعادة

إيكور5   ( EcoRV)وهو نوكلياز اقتطاع داخلي من النوع الثاني، يُستخلص من سلالات معينة من الإشريكية القولونية (Ecoli)، وله اسم بديل يعرف ب إيكو ٣ (Eco32I).

في علم البيولوجيا الجزئية، استخدام إنزيمات القطع أمر شائع، حيث ينتج نهايات ممسوحة ,الإنزيم يتعرف على القواعد النيتروجينية الستة المتناوبة على سلسلة الدنا DNA 5′-GAT|ATC-3′ ، ويحدث قطعاً عمودياً وبالتالي فان السلسلة المتممة لها سوف تصبح 3′-CTA|TAG-5′..  ان هذه النهايات الممسوحة (blunt ends) في موقع الاستنساخ يمكن ربطها في موقع الاستنساخ بسهولة ولكن بكفاءة أقل من النهايات اللزجة (sticky ends).

 

البنية

هذا الإنزيم يتألف من خمس اليبتا شيت ((β-sheet والتي تكون محاطة بالتفافات حلزونية من نوع ألفا.

 

آلية العمل

آلية عمل إيكور 5 مماثلة لآلية عمل إيكور١ (EcoRI)، حيث أن إيكور 5 يشكل ما يسمى  بالهومودايمر (بروتين) في المحلول قبل ارتباطه ونشاطه بمكانه المحدد على دنا والذي يعرف بسلسلة الاعتراف. بدايةً يرتبط الإنزيم على DNA بشكل ضعيف، ويسير بشكل عشوائي على طول الجزيئات إلى أن يصل إلى مكانه المحدد اي سلسلة الاعتراف على دنا لأن ايكور5 يتمتع بخصوصية عالية تجاه موقعه على DNA.

إن ارتباط هذا الإنزيم يحرض حدوث تغيرات في تركيب الحمض النووي دنا DNA، حيث يؤدي ارتباط الانزيم إلى تقوس الحمض النووي بحوالي ٥٠ درجة تقريبا ، يؤدي انحناء الحمض النووي DNA الى تفكيك القواعد النيتروجينية وتوسيع الكهوف الصغيرة الثانوية وضغط الكهوف الرئيسية، وهذا يؤدي الى كسر رابطة الفوسفوديستر في الموقع الفعال للإنزيم ضمن سلسلة الاعتراف على الحمض النووي دنا مما يؤدي الى عملية قطع الدنا كما ان هذا الانزيم لا يحتاج الى تحلل مركب الطاقة ATP [1].

إيكور٥ هو انزيم من النوع الثانوي والوحيد من أنواع انزيمات نيوكلياز القطع الداخلي الذي يحرض على حدوث تغييرات بروتينية جزئية كبيرة على مستوى الحمض النووي دنا DNA [2].

 

الاستخدام

إيكور٥ يستخدم غالباً لقطع البلازميد الناقل لإدخال المورثة المرغوب بها أثناء استنساخ المورثات، ويمكن الحصول على الانزيم الإنزيم بواسطة العديد من الشركات المصنعة ، ويحتاج هذا الأنزيم إلى البومين المصل البقري ليعمل بكفاءة عالية [3].

 

المراجع 

  1. Pingoud A, Jeltsch A (2001). “Structure and function of type II restriction endonucleases”. Nucleic Acids Research. 29 (18): 3705–3727. doi:10.1093/nar/29.18.3705PMC 55916 . PMID 11557805.
  2. Bitinaite J, Wah DA, Aggarwal AK, Schildkraut I (1998). “FokI dimerization is required for DNA cleavage”. Proc Natl Acad Sci USA. 95 (18): 10570–10575. doi:10.1073/pnas.95.18.10570PMC 27935 . PMID 9724744.
  3. Zahran, M., Daidone, I., Smith, J. C., & Imhof, P. (2010). Mechanism of DNA recognition by the restriction enzyme EcoRV. Journal of Molecular Biology, 401(3), 415-432.

 

وصلات خارجية

https://en.wikipedia.org/wiki/EcoRV

 

وصلات داخلية

EcoRI

https://en.wikipedia.org/wiki/EcoRI

الإشريكية القولونية

https://ar.wikipedia.org/wiki/%D8%A5%D8%B4%D8%B1%D9%8A%D9%83%D9%8A%D8%A9_%D9%82%D9%88%D9%84%D9%88%D9%86%D9%8A%D8%A9

Sticky and blunt ends

https://en.wikipedia.org/wiki/Sticky_and_blunt_ends